triSulfo-Cy5.5 DBCO的制備方法有哪些
2026-02-01
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triSulfo-Cy5.5 DBCO 的制備主要基于三磺酸基修飾的 Cy5.5 熒光染料與 DBCO 基團(tuán)的共價(jià)偶聯(lián)，其核心步驟涉及熒光核心結(jié)構(gòu)修飾、磺酸基團(tuán)引入、DBCO 基團(tuán)連接及產(chǎn)物純化驗(yàn)證，具體制備過(guò)程及關(guān)鍵點(diǎn)如下：
一、核心反應(yīng)原理
triSulfo-Cy5.5 DBCO 的制備基于三磺酸基修飾的 Cy5.5 熒光染料與 DBCO 基團(tuán)的共價(jià)偶聯(lián)。Cy5.5 是一種近紅外熒光染料，具有明亮的熒光信號(hào)和良好的光穩(wěn)定性，適用于生物成像和分子標(biāo)記。通過(guò)引入三個(gè)磺酸基團(tuán)（-SO??），顯著提高了染料的水溶性和生物相容性，同時(shí)降低了非特異性結(jié)合。DBCO 基團(tuán)則通過(guò)無(wú)銅點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)（SPAAC）與疊氮基團(tuán)（-N?）發(fā)生特異性反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)生物分子的標(biāo)記。
二、制備步驟
合成三磺酸基修飾的 Cy5.5 熒光染料：
在 Cy5.5 熒光染料分子上引入三個(gè)磺酸基團(tuán)，通常通過(guò)磺化反應(yīng)實(shí)現(xiàn)。
磺化反應(yīng)的條件需要嚴(yán)格控制，以確保磺酸基團(tuán)的位置和數(shù)量符合要求。
連接 DBCO 基團(tuán)：
通過(guò)共價(jià)鍵將 DBCO 基團(tuán)連接到三磺酸基修飾的 Cy5.5 熒光染料上。
這一步驟通常通過(guò)酰胺化反應(yīng)或其他共價(jià)偶聯(lián)方法實(shí)現(xiàn)，確保 DBCO 基團(tuán)與熒光染料之間的穩(wěn)定連接。
連接臂的設(shè)計(jì)需有效分隔熒光基團(tuán)與 DBCO 反應(yīng)基團(tuán)，減少空間位阻，保證熒光性能與點(diǎn)擊反應(yīng)效率不受影響。
純化與驗(yàn)證：
制備完成后，需要通過(guò)凝膠過(guò)濾色譜、透析或沉淀等方法去除未反應(yīng)的游離染料和其他雜質(zhì)。
使用光譜分析、質(zhì)譜等手段驗(yàn)證標(biāo)記效率和標(biāo)記位點(diǎn)，確保產(chǎn)物的純度和質(zhì)量。
三、關(guān)鍵制備條件
反應(yīng)條件優(yōu)化：
標(biāo)記反應(yīng)效率受溫度、pH、反應(yīng)時(shí)間及目標(biāo)分子疊氮密度等因素影響。
通常反應(yīng)在室溫至 37 攝氏度、中性 pH 條件下進(jìn)行數(shù)小時(shí)，以獲得較佳的反應(yīng)效果。
光穩(wěn)定性保護(hù)：
作為熒光染料，長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)光照射可能導(dǎo)致信號(hào)衰減。
在制備過(guò)程中，建議對(duì)樣品進(jìn)行避光處理，以保護(hù)熒光信號(hào)的穩(wěn)定性。
四、制備產(chǎn)物的特性
熒光特性：
triSulfo-Cy5.5 DBCO 具有強(qiáng)烈的近紅外熒光發(fā)射特性，較大吸收波長(zhǎng)約為 675-683 nm，較大發(fā)射波長(zhǎng)約為 695-703 nm。
這種熒光特性使其適用于高靈敏度生物成像和分子標(biāo)記，特別是在深層組織成像中具有優(yōu)勢(shì)。
化學(xué)特性：
磺酸基團(tuán)和 DBCO 末端提供了良好的反應(yīng)活性與水相穩(wěn)定性。
但需避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或強(qiáng)還原劑中，以防分解或熒光淬滅。
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